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  TÉRMINO DEL GLOSARIO correspondiente a:  T
Tecnologías De Secuenciación Masiva:
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Fecha de incorporación al glosario: 14-12-2016 Fecha de la última modificación: 14-12-2016
Oxford nanopore MinION
Definición: La secuenciación masiva, NGS (del inglés Next Generation Sequencing) es una tecnología de secuenciación ADN, es decir, permite establecer el orden de los nucleótidos en un fragmento de ADN. La llamada NGS es capaz de realizar múltiples secuencias de forma paralela, produciendo millones de secuencias al mismo tiempo y a un coste muy bajo. Gracias a la secuenciación masiva se puede secuenciar, en lugar de un gen, múltiples genes o incluso un genoma completo. Las ventajas de la secuenciación masiva frente a la secuenciación convencional residen en la amplitud del análisis, necesidad de una menor cantidad de material genético, un menor coste y una mayor rapidez. El flujo de trabajo en rasgos generales consta de los siguientes pasos: construcción de la librería (dependerá del análisis a realizar: transcriptoma, genoma completo, 16S…), preparación del template, secuenciación y análisis de los datos. Dichas tecnologías a su vez se diferencian en la longitud de las reads, los errores cometidos, el rendimiento y el precio,ajustándose la elección de la plataforma utilizada a las necesidades de cada proyecto. La secuenciación masiva se puede realizar a diferentes niveles y con diferentes longitudes de lectura, diferenciando entre Short-read y Long-read Dentro de las plataformas que utilizan Short-read encontramos diferentes tecnologías: Illumina, la cual utiliza tecnologías de secuenciación por síntesis, utilizando moléculas terminadoras marcadas con fluorescencia, cuyos terminadores pueden ser eliminados permitiendo que la siguiente base se añada, determinando así la composición de la hebra de ADN. Algunos de sus equipos son MiSeq, NextSeq 500 o HiSeq 3000. Ion Torrent, por otro lado, detecta los protones que se liberan al incorporarse cada dNTP, identificando sus diferentes equipos cada nucleótido mediante variaciones de pH. Algunos de sus equipos son Ion S5 o Ion Chef. Las secuencias individuales más cortas contienen más errores que la secuencias obtenida por Sanger (método convencional de tipo enzimático, donde se copia una cadena de ADN mediante el uso de dideoxinucleótidos, que provocan que la cadena termine al incorporarse dichas bases a la cadena. La cadena final se resuelve por electroforesis capilar), pero, como pueden repetirse múltiples veces (conocido como coverage), se llega a conocer la secuencia de millones de pares de bases. Dentro de las tecnologías de Long-reads, diferenciamos entre: PacBio, en la que su tecnología está basada en SMRT (del inglés Single Molecule Real-Time) por tanto, aprovechando el proceso de replicación del ADN se puede observar la síntesis de ADN, de tal manera que los 4 nucleótidos estarán marcados con fluorescencia generando espectros de emisión diferentes y de esta manera determinar de qué nucleótido se trata. Oxford nanopore es un secuenciador de ADN portable y a tiempo real en el cual encontramos nanoporos proteicos insertados en una membrana polimérica al cual se le aplica un potencial, de tal manera que el ADN pasa base a base por el nanoporo apareciendo diferencias de potencial dependiendo de la base que pase y determinando así el orden de las bases de la hebra de ADN. La secuenciación masiva está hoy en día en auge, encontrando grandes proyectos internacionales. Uno de los grandes proyectos de secuenciación masiva, es el proyecto de los 1000 genomas en el que se ha secuenciado el genoma de 2504 personas de 26 poblaciones diferentes de todo el mundo con objeto de catalogar la variación genética en el ser humano, a su vez ha permitido caracterizar la historia y demografía de las poblaciones humanas ancestrales.