Definición de Hibridación In Situ

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Definición de Hibridación In SituLa hibridación sedante es un método que permite el descubrimiento de series de ADN o ARN detalladas en una sección de tejido o en células, utilizando series correspondientes de ADN o ARN, en una sola hebra, marcada, que forma las „sondas”, que pueden ser ADN o ARN clonados, u oligonucleótidos sintéticos. Las sondas desarrollan enlaces de hidrógeno (puentes entre el átomo de hidrógeno y átomos fuertemente electronegativos tales como oxígeno, flúor y nitrógeno) con ADN o ARN diana complementario en tejidos o células, y también se pueden imaginar contaminados (32 P, 125 I, 35 S y también 3h), o no radiactivos (peroxidasa, biotina, digoxigenina), o por un fluorocromo (fluoresceína, rodamina, cianina, etc.), caracterizando este último la hibridación fluorescente sedante (FISH). Las diferentes estrategias de hibridación en reposo impuestas por numerosos laboratorios individuales muestran la naturaleza diana de los ejemplos a examinar.

Todos los protocolos de prueba deben considerar varios factores críticos, como su sensibilidad, potencia sesgada, precisión e integridad. Las células o tejidos necesitan pretratarse para mantener la morfología celular, la estabilidad y el establecimiento de la diana. El tratamiento necesita hacer que las células sean suficientemente absorbentes para permitir la entrada de la sonda de ácido nucleico, así como la eliminación de cualquier sonda no unida. Se utilizará el tipo de secuencia y el tamaño apropiados de la sonda de ácido nucleico (ADN / ARN monocatenario o bicatenario), identificando la especificidad y el nivel de sensibilidad del método. Además de lo anterior, el tipo de observación y también el sistema de descubrimiento deben seleccionarse meticulosamente a medida que establecen el nivel de sensibilidad, la facilidad de descubrimiento y la precisión de la cuantificación de los objetivos a lograr. Como resultado, las condiciones de hibridación deben seleccionarse minuciosamente, de acuerdo con la naturaleza de la sonda y la aplicación deseada.

Por qué se utiliza la hibridación in situ para

Por qué se utiliza la hibridación in situ paraSe ha utilizado en la terapia del virus del papiloma humano (VPH, intestivirus, Papilomavirus), virus de Epstein Barr (EBV, Linfocriptovirus, Herpesviridae), Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH, Lentivirus, Retroviridae), adenovirus (Mastadenovirus, Adenoviridae), por nombrar algunos. También se utiliza en el reconocimiento y diferenciación de hifas de numerosas especies de hongos en tejidos, como los de la categoría Aspergillus, entre hialohifomicosis, entre otros. La hibridación sedentaria sirve para identificar el genoma viral en las células, dividir los subtipos virales y examinar si la infección existe o es productiva. La hibridación sentada (ISH) se encuentra entre los enfoques fundamentales para desarrollar la biología y ofrece la ventaja de imaginar e incluso cuantificar moléculas clínicamente apropiadas en un contexto morfológico. Es una de las técnicas más cruciales para visualizar la expresión génica en el grado móvil en las células. La identificación de los patrones de expresión genética en las células puede proporcionar información espacial y temporal esencial, así como es el primer paso para comprender la función génica.

HPV así como hibridación in situ

HPV así como hibridación in situLa hibridación in situ (HIS) descubre ciertas secuencias de ADN o ARN que hacen uso de una serie complementaria de ácidos nucleicos clasificados radiactiva o químicamente (sonda). Cuando se encuentran bajo problemas excelentes, este método brinda la oportunidad de descubrir no solo el tipo viral y su área en las áreas contaminadas, sino principalmente el estado físico del virus, ya sea episómico o incorporado directamente en el genoma de la célula huésped. Algunos escritores utilizan este método con resultados pertinentes y reflexiones finales, especialmente con respecto a la existencia de bits virales incluidos en el genoma y también su función pronóstica. La hibridación sedentaria se puede ejecutar en material bloqueado con parafina, raspados citológicos e incluso en biopsias congeladas. Esta técnica permite la localización de ADN o ARN viral en células especificadas por un método detallado e incluso en cromosomas separados. Sin embargo, este es un enfoque laborioso con una sensibilidad relativamente reducida. De hecho, las fijaciones histológicas con la opción de formalina no tamponada durante más de 24 horas pueden poner en peligro estos resultados, así como también pueden tener lugar reacciones falsas negativas.

Cómo se ejecuta la hibridación in situ?

Cómo se ejecuta la hibridación in situTodo comienza con la toma de una muestra del tejido afectado (en el caso del cáncer, por ejemplo) obtenida mediante biopsia. En general, para realizar una evaluación histopatológica, las muestras deben procesarse para preservar su estabilidad. Para esto, se usan métodos de conservación de células como la adicción a la formalina. La formalina es un compuesto que mantiene la estructura física y también molecular de las células a analizar. A continuación, el tejido se trata, experimenta el proceso de inclusión en parafina, que convierte la muestra en un bloque que se puede tratar convenientemente sin dañar el ejemplo. Este bloque de parafina que contiene las células se „corta” después en un dispositivo específico para obtener piezas de espesor micrométrico que se utilizarán más adelante en la técnica HIS.

Sin embargo, todo este tratamiento debe cumplir con estrictas normas técnicas para no hacer inviable el análisis hereditario del material. Progresivamente, se están estableciendo y mejorando herramientas para ayudar a los patólogos a determinar biomarcadores que puedan ayudar en el diagnóstico y pronóstico médico de diferentes patologías. Estamos hablando de la era de los diagnósticos moleculares, exámenes que hacen uso de la evaluación hereditaria para ayudar a identificar cambios en el ADN que pueden predecir una afección específica o definir un diagnóstico de manera segura y precisa.

Esto significa que con este tipo de tecnología es factible determinar modificaciones en el código genético de las células, así como realizar un análisis arquitectónico móvil total de una célula específica. A pesar del complicado principio, comprender la hibridación sentada es razonablemente sencillo. Imagine que un individuo cree en un tipo específico de cáncer. Al acumular una pequeña muestra del tejido afectado, la hibridación in situ puede analizar el ADN de las células existentes en el ejemplo para detectar cambios genéticos que podrían estar asociados con células cancerosas. Además, los patólogos pueden examinar la estructura y la forma de las células con la ayuda de un microscopio, inspeccionando si hay características en las células que puedan mostrar la presencia de las células cancerosas en cuestión. En conjunto, toda esta información es esencial para asegurarse de que el patólogo pueda hacer un diagnóstico médico, pronosticar el desarrollo de la enfermedad y especificar los enfoques terapéuticos más efectivos.

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