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Fibao Una perspectiva molecular en medicina
TECNICAS
Captura de la superficie celular (CSC)
Prevención
Tratamiento
Etiopatogenia
Diagnóstico
Pronóstico
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Fecha de Publicación: 14-7-2009 Última actualización : 14-7-2009
Resumen
La técnica llamada captura de la superficie celular (CSC) permite la identificación y cuantificación relativa de las glicoproteínas de membrana mediante el análisis de glicopéptidos de superficie por espectrometría de masas. Esta técnica permite obtener un perfil bastante completo de las glicoproteínas presentes en la superficie celular. Conocer este glicoproteoma abre la posibilidad de detectar nuevos marcadores celulares de diferenciación no accesibles por otros métodos.
Concepto
La animación describe de forma esquemática la técnica de captura de glicoproteínas de la superficie celular (CSC)
Para la mayoría de los tipos celulares no se sabe qué proteínas se expresan en la superficie celular ni cómo estos patrones de expresión cambian cuantitativamente cuando la célula sufre perturbaciones o diferenciación.

La glicosilación es una característica distintiva común a casi todas las proteínas de superficie. La técnica CSC (Cell Surface–Capturing) aprovecha esa característica y toma como diana los glicanos en vez de las proteínas, cosa que facilita mucho la selección inicial. Frente a otras técnicas como la citometría de flujo en las que es necesario disponer de anticuerpos específicos para cada proteína y por tanto predecir su presencia en la membrana antes de detectarla, la CSC se basa en un marcado químico que no necesita de esa especificidad uniéndose el mismo marcador a todos los glicanos. La especificidad necesaria para identificar los distintos tipos de proteínas se consigue analizando el espectro de cada uno de los péptidos (fragmentos de proteína) que quedan unidos a los glicanos marcados, tras la fase de proteolisis.

El hecho de que pueda realizarse con células vivas y la posibilidad de cuantificación de cada una de las proteínas detectadas son características muy valiosas de esta técnica.

Fases de la técnica CSC:

  • 1.Los glicanos son selectivamente oxidados y marcados con hidrazida de biocitina (e-biotinil-L-lisina)
  • 2.Las glicoproteínas son digeridas
  • 3.Los glicopéptidos son purificados por afinidad
  • 4.Los péptidos son liberados y analizados por espectrofotometría de masas
  • 5.Los espectros de los péptidos se analizan y se comparan con bases de datos de secuencias de proteínas para predecir a qué proteína de superficie pertenecen.
Esta técnica también permite identificar los sitios de glicosilación en cada proteína.

Bibliografía