La electroforesis en gel es un método utilizado para diferentes fragmentos de ADN de acuerdo con su tamaño. Los ejemplos de ADN se cargan directamente en pocillos (pocillos) situados en un extremo de un gel, y se aplica una corriente eléctrica para avanzar con el gel. Los fragmentos de ADN están cargados negativamente, por lo que se reubican hacia el electrodo favorable. Debido a que todas las piezas de ADN tienen exactamente la misma cantidad de costo por masa, los fragmentos más pequeños cruzan el gel más rápido que los más grandes.
Cuando un gel se empaña con un tinte que se une al ADN, los fragmentos de ADN se pueden ver como bandas, cada una representando un grupo de piezas de ADN del mismo tamaño exacto. La electroforesis en gel es una técnica utilizada para dividir fragmentos de ADN (u otras macromoléculas como ARN y proteínas saludables) en función del tamaño y la carga. La electroforesis implica pasar una corriente a través de un gel que incluye las moléculas de la pasión. Debido a su tamaño y carga, las moléculas se moverán a través del gel en diferentes instrucciones o a diferentes velocidades, lo que les permite separarse entre sí. Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de tarifa por masa. Debido a esto, la electroforesis en gel de las piezas de ADN se separa basándose solo en la dimensión. Con el uso de la electroforesis, podemos ver la cantidad de diferentes fragmentos de ADN que existen en una muestra y cuán grandes permanecen en relación entre sí. Además, podemos establecer el tamaño absoluto de un elemento de ADN examinándolo junto con el ADN” básico”, compuesto por piezas de ADN de dimensiones bien conocidas.
Para qué se utiliza principalmente la electroforesis en gel?
Como su nombre indica, la electroforesis en gel implica un gel: una lámina de material similar a la gelatina. Los geles de separación de ADN generalmente están hechos de un polisacárido llamado agarosa, que se puede encontrar en el tipo de copos secos en polvo. Cuando la agarosa se calienta en un tampón (agua con algunas sales) y también se deja enfriar, crea un gel sólido algo blando. A nivel molecular, el gel es una matriz de moléculas de agarosa que se mantienen entre sí mediante enlaces de hidrógeno y forman microporos. En un extremo, el gel tiene cavidades dentales en forma de bolsillo llamadas Pocillos, donde ciertamente se colocarán muestras de ADN. Antes de añadir las muestras de ADN, el gel necesita colocarse en una caja de gel. Un extremo de la carcasa está unido a un electrodo favorable, mientras que el otro extremo está unido a un electrodo adverso. El texto del envase, donde se coloca el gel, se llena con una solución de barrera que tiene sal que puede llevar corriente. Aunque no se puede ver en la imagen de arriba (muchas gracias a mis fantásticas habilidades creativas), la tapa carga la caja de gel hasta el nivel en el que apenas cubre el gel. El extremo del gel con los pocillos se ocupa del electrodo adverso. El extremo libre de fosa (al que migrarán las piezas de ADN) está orientado hacia el electrodo positivo.
Mediante el uso de un presente eléctrico en una matriz de gel, los investigadores tienen la capacidad de separar moléculas de ADN (ácido desoxirribonucleico), ARN (ácido ribonucleico) y proteínas. Cuando se separan estos tres elementos, se toma una imagen del gel, creando fotos de diferentes componentes moleculares. Este proceso se conoce como electroforesis y también nos ayuda a reconocer mejor y también reconocer las partes moleculares de los puntos vivos. Investigación científica forense: en el mundo forense, la electroforesis en gel se utiliza para adquirir el ADN de un criminal a partir de una huella dactilar. Esto implica que los investigadores pueden determinar si dos piezas de ADN, una encontrada en la escena de la actividad criminal y la otra perteneciente al sospechoso, son iguales. Biología molecular: los microbiólogos utilizan esta técnica en su vida diaria. Este proceso permite una división y compañía de ADN y ARN por dimensión, lo que facilita la investigación molecular. Genética: La electroforesis en gel no solo brinda a los genetistas una foto clara del ADN, sino que también los ayuda a preparar el ADN para un proceso de clonación y modificación genética. Microbiología: dado que la microbiología se concentra en la investigación de microorganismos en los tipos más pequeños, este método sirve para obtener detalles sobre estos seres. La virología, una rama de la microbiología, también utiliza este proceso para identificar diversos estreses de infecciones. Bioquímica y biología: los bioquímicos colaboran con componentes móviles, principalmente proteínas y también ácidos nucleicos. Estos elementos también se pueden mapear usando electroforesis en gel.
Exactamente cómo se mueven los fragmentos de ADN con el gel?
Tan pronto como el gel está en el envase, cada una de las muestras de ADN que deseamos examinar (por ejemplo, cada reacción de PCR o cada plásmido digerido por restricción) se mueve completamente a uno de los Pocillos. Se reserva un pocillo para una escalera de ADN, un patrón de referencia que contiene piezas de ADN de tamaños bien conocidos. Las escaleras de ADN para negocios se pueden encontrar en diferentes variedades de tamaño, por lo que podemos elegir una que tenga una excelente „cobertura de seguro” para la serie de tamaño anticipado de nuestros fragmentos. Después de eso, la caja se enciende y la existente comienza a fluir a través del gel. Las partículas de ADN están cargadas negativamente debido a los grupos fosfato en sus cadenas principales de azúcar-fosfato, por lo que comienzan a moverse con la matriz de gel, hacia el polo favorable. Cuando se activa la energía, así como el paso existente a través del gel, se afirma que el gel está funcionando. ¿Qué pieza de ADN ganará la „carrera” hacia el puesto favorable? Los elementos breves de ADN ciertamente viajarán a través de los poros de la matriz de gel más rápido que los elementos más largos. Después de que el gel haya ayudado durante mucho tiempo, los elementos de ADN más cortos estarán más cerca del polo positivo del gel, mientras que los más largos permanecerán más cerca de los pocillos. Piezas extremadamente breves de ADN pueden correr a lo largo del gel si se dejan durante suficientes períodos de tiempo (¡algo de lo que ciertamente me sentí culpable!).